Citometria de Fluxo

 

A citometria de fluxo é uma técnica analítica utilizada para medir e analisar várias características de células individuais em suspensão. Essa técnica é amplamente empregada em pesquisa biomédica, diagnóstico clínico e outras áreas relacionadas à biologia celular e molecular. Aqui estão alguns detalhes técnicos, procedimentos e exemplos de aplicação da citometria de fluxo:

Metodologia:

1. Preparação da Amostra:

   • As células são suspensas em um meio apropriado para manter sua viabilidade e integridade.
   • Podem ser usados corantes fluorescentes para marcar diferentes componentes celulares, como proteínas, DNA, RNA, e outras moléculas.

2. Fluorescência e Espalhamento de Luz:

   • As células são transportadas em uma corrente líquida (fluxo) por um feixe de laser.
   • Quando atingidas pelo laser, as células e as partículas dentro delas dispersam e emitem luz fluorescente, cuja intensidade e espectro podem ser detectados.

3. Detecção e Análise:

   • Detectores de luz capturam a intensidade e a fluorescência emitida pelas células e partículas.
   • Os sinais capturados são convertidos em dados digitais que podem ser analisados por software especializado.
   • Os parâmetros analisados incluem tamanho celular, complexidade, conteúdo de DNA, expressão de proteínas e outros marcadores específicos.

4. Classificação e Separacão Celular:

   • Além da análise, a citometria de fluxo pode ser combinada com sistemas de classificação e separação celular, como a FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting), que permite isolar células com base em suas propriedades específicas.

Exemplos de Analitos Pesquisados:

1. Imunofenotipagem de Células Sanguíneas:

   • Identificação e caracterização de diferentes tipos de células do sistema imunológico, como linfócitos T, linfócitos B, células natural killer, etc.

2. Análise de DNA e RNA:

   • Determinação da ploidia, integridade do DNA, síntese de RNA, entre outros.

3. Avaliação de Viabilidade e Proliferação Celular:

   • Determinação da viabilidade celular, apoptose e ciclo celular.

4. Expressão de Antígenos e Proteínas:

   • Quantificação de proteínas específicas em células ou amostras biológicas.

Importância para o Diagnóstico:

1. Hematologia Clínica:

   • No diagnóstico de doenças do sangue, como leucemias e linfomas, a imunofenotipagem por citometria de fluxo é uma ferramenta fundamental.

2. Oncologia:

   • Para identificar subpopulações celulares, caracterizar tumores e monitorar a resposta ao tratamento.

3. Imunologia:

   • Na avaliação de doenças autoimunes, imunodeficiências e resposta imune a agentes patogênicos.

4. Pesquisa Biomédica:

   • Em estudos sobre regulação genética, diferenciação celular, desenvolvimento de fármacos e terapias celulares.

A citometria de fluxo oferece uma abordagem poderosa e versátil para analisar características celulares em nível individual, desempenhando um papel essencial no avanço da compreensão científica e no diagnóstico de uma ampla gama de condições médicas.

Referências:

Manohar SM, Shah P, Nair A. Flow cytometry: principles, applications and recent advances. Bioanalysis. 2021 Feb;13(3):181-198.

Robinson JP. Flow cytometry: past and future. Biotechniques. 2022 Apr;72(4):159-169. doi: 10.2144/btn-2022-0005.

Selliah N, Eck S, Green C, Oldaker T, Stewart J, Vitaliti A, Litwin V. Flow Cytometry Method Validation Protocols. Curr Protoc Cytom. 2019 Jan;87(1):e53.

Rieger AM. Flow Cytometry and Cell Cycle Analysis: An Overview. Methods Mol Biol. 2022;2579:47-57.

Peters JM, Ansari MQ. Multiparameter flow cytometry in the diagnosis and management of acute leukemia. Arch Pathol Lab Med. 2011 Jan;135(1):44-54.

Interleucina 11 (IL-11) e sua importância na trombopoiese

 Autoria: Equipe Biomedinar

A interleucina-11 (IL-11) é uma citocina anti-inflamatória e hematopoiética, o que significa que desempenha um papel importante na regulação do sistema imunológico e na formação de células do sangue, incluindo a trombopoiese, que é o processo de formação de plaquetas no sangue.

A IL-11 é produzida por diferentes tipos de células, incluindo células estromais ósseas, células endoteliais e células do fígado. Sua função principal é promover a produção de plaquetas, que são fragmentos celulares essenciais para a coagulação sanguínea.

A trombopoiese começa com a diferenciação das células-tronco hematopoiéticas em megacariócitos, que são células precursoras das plaquetas. A IL-11 atua estimulando a maturação dos megacariócitos e aumentando a produção de plaquetas a partir deles. Ela exerce sua influência por meio da interação com o receptor de IL-11 presente nas células-alvo.

A importância da IL-11 na trombopoiese torna-se evidente em condições em que a produção de plaquetas é comprometida. Por exemplo, em situações de trombocitopenia, que é a redução do número de plaquetas no sangue, a administração de IL-11 pode ser considerada como uma forma de estimular a produção de plaquetas e restaurar os níveis normais no organismo.

Além disso, a IL-11 também desempenha um papel significativo na modulação da resposta imunológica, especialmente como uma citocina anti-inflamatória. Ela pode ajudar a atenuar a inflamação em diversas condições, contribuindo assim para a homeostase imunológica.

Em resumo, a interleucina-11 desempenha uma função crucial na trombopoiese, estimulando a produção de plaquetas a partir dos megacariócitos. Seus efeitos são importantes para manter a hemostasia e prevenir distúrbios de coagulação. Além disso, sua capacidade de modular a resposta imunológica destaca sua relevância em contextos mais amplos relacionados à regulação do sistema imunológico.

Referências:

Kobayashi S, Teramura M, Oshimi K, Mizoguchi H. Interleukin-11. Leuk Lymphoma. 1994 Sep;15(1-2):45-9. doi: 10.3109/10428199409051676. PMID: 7532057.

Quesniaux VF, Mayer P, Liehl E, Turner K, Goldman SJ, Fagg B. Review of a novel hematopoietic cytokine, interleukin-11. Int Rev Exp Pathol. 1993;34 Pt A:205-14. PMID: 8454414.

Schwertschlag US, Trepicchio WL, Dykstra KH, Keith JC, Turner KJ, Dorner AJ. Hematopoietic, immunomodulatory and epithelial effects of interleukin-11. Leukemia. 1999 Sep;13(9):1307-15. doi: 10.1038/sj.leu.2401514. PMID: 10482979.

Neben S, Turner K. The biology of interleukin 11. Stem Cells. 1993 Jul;11 Suppl 2:156-62. doi: 10.1002/stem.5530110825. PMID: 8401258.

Você conhece o Elisa (Ensaio de Imunoabsorção Enzimática)?

Autoria: Equipe Biomedinar

O Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA), amplamente empregada em laboratórios clínicos, desempenha um papel crucial na detecção e quantificação de biomoléculas, destacando-se por sua sensibilidade e especificidade. 

Existem diversos tipos de ELISA, cada um adaptado para analisar diferentes alvos.

ELISA Direto:

Procedimento:

Receptores (anticorpos) são adsorvidos diretamente na placa.

Amostra é aplicada, seguida por um conjugado marcado.

A reação é revelada e quantificada.

Exemplo:

Detecção de antígenos virais diretos em soros.

ELISA Indireto:

Procedimento:

O antígeno é adsorvido na placa.

Após a aplicação da amostra, um anticorpo secundário marcado é introduzido.

A reação é revelada e quantificada.

Exemplo:

Identificação de anticorpos específicos em soros, como em testes de HIV.

ELISA Sanduíche:

Procedimento:

O primeiro anticorpo é adsorvido na placa.

Amostra é aplicada, capturando o antígeno.

Um segundo anticorpo marcado, específico para outra região do antígeno, é introduzido.

A reação é revelada e quantificada.

Exemplo:

Medição de níveis de biomarcadores, como troponina cardíaca.

ELISA Competitivo:

Procedimento:

Antígeno é adsorvido na placa.

Amostra e antígeno marcado competem pelo mesmo sítio de ligação.

A reação é revelada e quantificada.

Exemplo:

Drogas terapêuticas, onde a competição é entre o fármaco e um análogo marcado.

O ELISA supera essas as técnicas anteriormente usadas em termos de sensibilidade, especificidade e facilidade de automação. 

Algumas razões pelas quais o ELISA é preferido incluem:

Sensibilidade: 

Detecta concentrações extremamente baixas de antígenos ou anticorpos.

Especificidade: 

Pode diferenciar entre variantes específicas de antígenos ou anticorpos.

Quantificação: 

Permite a quantificação precisa das substâncias-alvo.

Automação: 

Processos automatizados aumentam a eficiência e reduzem erros.

Essas vantagens tornam o ELISA uma escolha mais versátil e eficaz em ambientes laboratoriais, contribuindo para resultados mais confiáveis e rápidos.

Referências:

Tabatabaei MS, Ahmed M. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Methods Mol Biol. 2022;2508:115-134. doi: 10.1007/978-1-0716-2376-3_10. PMID: 35737237.

Aydin S. A short history, principles, and types of ELISA, and our laboratory experience with peptide/protein analyses using ELISA. Peptides. 2015 Oct;72:4-15. doi: 10.1016/j.peptides.2015.04.012. Epub 2015 Apr 20. PMID: 25908411.

Lin AV. Direct ELISA. Methods Mol Biol. 2015;1318:61-7. doi: 10.1007/978-1-4939-2742-5_6. PMID: 26160564.

Lin AV. Indirect ELISA. Methods Mol Biol. 2015;1318:51-9. doi: 10.1007/978-1-4939-2742-5_5. PMID: 26160563.

Guo M, Du S, Lai L, Wu W, Huang X, Li A, Li H, Li C, Wang Q, Sun L, Liu T, Tian T, Wang S, Liang M, Li D, Xie C, Li J. Development and evaluation of recombinant E2 protein based IgM capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and double antigen sandwich ELISA for detection of antibodies to Chikungunya virus. PLoS Negl Trop Dis. 2022 Dec 8;16(12):e0010829. doi: 10.1371/journal.pntd.0010829. PMID: 36480572; PMCID: PMC9767333.

Kohl TO, Ascoli CA. Direct Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Cold Spring Harb Protoc. 2017 Jul 5;2017(7):pdb.prot093740. doi: 10.1101/pdb.prot093740. PMID: 28679705.