Citometria de Fluxo

 


A citometria de fluxo é uma técnica analítica utilizada para medir e analisar várias características de células individuais em suspensão. Essa técnica é amplamente empregada em pesquisa biomédica, diagnóstico clínico e outras áreas relacionadas à biologia celular e molecular. Aqui estão alguns detalhes técnicos, procedimentos e exemplos de aplicação da citometria de fluxo:

Metodologia:

  1. Preparação da Amostra:

    • As células são suspensas em um meio apropriado para manter sua viabilidade e integridade.
    • Podem ser usados corantes fluorescentes para marcar diferentes componentes celulares, como proteínas, DNA, RNA, e outras moléculas.

  2. Fluorescência e Espalhamento de Luz:

    • As células são transportadas em uma corrente líquida (fluxo) por um feixe de laser.
    • Quando atingidas pelo laser, as células e as partículas dentro delas dispersam e emitem luz fluorescente, cuja intensidade e espectro podem ser detectados.

  3. Detecção e Análise:

    • Detectores de luz capturam a intensidade e a fluorescência emitida pelas células e partículas.
    • Os sinais capturados são convertidos em dados digitais que podem ser analisados por software especializado.
    • Os parâmetros analisados incluem tamanho celular, complexidade, conteúdo de DNA, expressão de proteínas e outros marcadores específicos.

  4. Classificação e Separacão Celular:

    • Além da análise, a citometria de fluxo pode ser combinada com sistemas de classificação e separação celular, como a FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting), que permite isolar células com base em suas propriedades específicas.

Exemplos de Analitos Pesquisados:

  1. Imunofenotipagem de Células Sanguíneas:

    • Identificação e caracterização de diferentes tipos de células do sistema imunológico, como linfócitos T, linfócitos B, células natural killer, etc.

  2. Análise de DNA e RNA:

    • Determinação da ploidia, integridade do DNA, síntese de RNA, entre outros.

  3. Avaliação de Viabilidade e Proliferação Celular:

    • Determinação da viabilidade celular, apoptose e ciclo celular.

  4. Expressão de Antígenos e Proteínas:

    • Quantificação de proteínas específicas em células ou amostras biológicas.

Importância para o Diagnóstico:

  1. Hematologia Clínica:

    • No diagnóstico de doenças do sangue, como leucemias e linfomas, a imunofenotipagem por citometria de fluxo é uma ferramenta fundamental.

  2. Oncologia:

    • Para identificar subpopulações celulares, caracterizar tumores e monitorar a resposta ao tratamento.

  3. Imunologia:

    • Na avaliação de doenças autoimunes, imunodeficiências e resposta imune a agentes patogênicos.

  4. Pesquisa Biomédica:

    • Em estudos sobre regulação genética, diferenciação celular, desenvolvimento de fármacos e terapias celulares.

A citometria de fluxo oferece uma abordagem poderosa e versátil para analisar características celulares em nível individual, desempenhando um papel essencial no avanço da compreensão científica e no diagnóstico de uma ampla gama de condições médicas.


Referências:

Manohar SM, Shah P, Nair A. Flow cytometry: principles, applications and recent advances. Bioanalysis. 2021 Feb;13(3):181-198.

Robinson JP. Flow cytometry: past and future. Biotechniques. 2022 Apr;72(4):159-169. doi: 10.2144/btn-2022-0005.

Selliah N, Eck S, Green C, Oldaker T, Stewart J, Vitaliti A, Litwin V. Flow Cytometry Method Validation Protocols. Curr Protoc Cytom. 2019 Jan;87(1):e53.

Rieger AM. Flow Cytometry and Cell Cycle Analysis: An Overview. Methods Mol Biol. 2022;2579:47-57.

Peters JM, Ansari MQ. Multiparameter flow cytometry in the diagnosis and management of acute leukemia. Arch Pathol Lab Med. 2011 Jan;135(1):44-54.


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